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细胞生物学实验
发布时间:2021-10-14 09:18:22

细胞缺氧/复氧实验

实验简介

以体外培养细胞为实验对象,将细胞置1%O2环境中培养损伤后复氧培养,建立细胞缺氧复氧模型。

服务要求

提供细胞需状态良好,无支原体污染,包括详细培养条件和倍增时间的说明。

提供结果

服务提供缺氧复氧损伤照片、完整实验报告(缺氧复氧模型建立实验原始数据及实验方法)。


瞬时转染实验

实验简介

瞬时转染是将DNA导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中,重组DNA导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的DNA不必整合到宿主染色体,可在较短时间内收获转染的细胞,并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。

服务要求

提供细胞株需状态良好,无支原体污染,包括详细培养条件和倍增时间的说明。瞬时转染多采用脂质体法,优化DNA与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测时间等合适转染条件能够提高转染效率。

提供结果

服务提供序列的设计和合成,细胞培养及转染试剂,实验报告(原始数据,实验方法和WB或qPCR检测结果)。


稳定转染实验

实验简介

将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

服务要求

根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定实验方案。

提供结果

服务提供细胞培养、转染试剂、选择性抗生素,稳定的单克隆细胞株2株,实验报告(qPCR,WB检测结果及原始记录,实验方法)


细胞增殖及毒性实验

实验简介

CCK8试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST–8,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。

服务要求

预实验待摸索条件:接种细胞数量、细胞贴壁及倍增之间、加药后的孵育时间、CCK8试剂加入量及孵育时间。核实客户提供材料是否对CCK8显色有影响。核实药物相关信息。

提供结果

服务提供实验原始数据、图片、分析结果;实验流程及完整报告一份。


流式细胞凋亡检测实验

实验简介

细胞凋亡是指由基因控制的细胞自主有序死亡的主动过程,涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。针对凋亡时期不同,流式检测的方法有所不同,常用检测方法Annexin V/PI双染法,TUNEL法。该实验可用于检测不同类型、不同处理方式、不同时期细胞凋亡状况及分析凋亡细胞比例。

服务要求

所用染色方法由实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定最终方案。客户制备样品要求细胞数量≥106个。

提供结果

服务提供实验原始数据、图片、分析结果;实验流程及完整报告一份。


流式细胞周期检测实验

实验简介

碘化丙啶(PI)是一种双链DNA荧光染料,碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后,可用流式检测法对细胞进行DNA含量测定,根据DNA含量分布情况进行细胞周期分析。流式细胞周期检测实验可用于研究细胞增殖、肿瘤发生发展、细胞药物耐受等涉及细胞增殖、分裂的研究。

服务要求

所用染色方法由实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定最终方案。客户制备样品要求细胞数量≥106个。

提供结果

服务提供实验原始数据、图片、分析结果;实验流程及完整报告一份。


免疫荧光实验

实验简介

免疫荧光是将免疫学方法与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。可用于石蜡切片、冰冻切片或爬片细胞样本的检测。

服务要求

固定的组织或者细胞爬片样本(也可提供细胞,我方培养爬片后进行后续实验)。

提供待检测抗原,检测用一抗信息。

确定切片种类及拍摄要求等。

提供结果

服务提供完整实验报告,包括实验方法、步骤、原始的免疫荧光照片等。

注意事项

客户提供实验样本。

样本需尽快低温保存、运输。


Transwell实验

实验简介

Transwell小室的滤膜孔径一般为8μm,在侵袭实验中,膜孔都被Matrigel覆盖,细胞不能自由穿过,必须分泌水解酶,并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel 的滤膜,这与体内情况较为相似。细胞欲进入下室,先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解,方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力

服务要求

Transwell细胞侵袭实验由实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定最终方案。根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber,常用的为8.0μm孔径。

提供结果

服务提供实验原始数据、图片、分析结果;实验流程及完整报告一份。


TUNEL检测实验

实验简介

细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现180-200bp的DNA ladder。TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 488)可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶(TdT)的作用下,在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基(3´-OH)末端掺入Alexa Fluor 488-12-dUTP,从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

服务要求

根据实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定最终方案。

提供结果

服务提供实验原始数据、图片、分析结果;实验流程及完整报告一份。


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