产品介绍

细胞在发生凋亡时, 会在生理生化和细胞形态上发生一系列变化, 在凋亡中晚期, 激活的DNA内切酶会切 断核小体间的基因组DNA, DNA会被降解成为约180bp-200bp 的片段, 而正常或者增殖细胞很少发生DNA断裂。利用这个差异, 用脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT 酶) 把FITC标记的dUTP标记到断裂DNA片段的3' -0H末端, 然后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测, 这个方法被称为TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick- End Labeling)法细胞凋亡检测。

保存条件

-20℃保存，避免反复冻融。

注意事项

1. 为了避免试剂损失, 使用前可以低速短暂离心融化后的试剂, 然后小心开管取用;

2. 试剂盒使用后尽快放回-20℃冰箱保存;

3. TdT 酶在-20℃保存时不会凝固, 不需要提前取出融化, 只需在使用前迅速从-20℃冰箱中拿出取用后 立即放回-20℃保存。

4. FITC-12-dUTP标记混合液对光敏感, 避光储存于 -20℃, 在标记时, 孵育缓冲液或者包含标记混合物 的载玻片要避免光照;

5. 标记反应混合液包含二甲肿酸钾(potassium cacodylate) , 避免接触皮肤和眼睛, 操作时戴好手套;

6. 如果用于石蜡切片的检测, 需自备蛋白酶K, 二甲苯;

7. 在标记反应中, 推荐使用盖片或封口膜覆盖样本, 保证反应液均匀分布, 并避免孵育过程中缓冲液蒸 发损失。准备覆盖膜时, 可剪下一片Parafilm。封口膜, 使其稍大于样本, 并将一角折起便于在接下 来实验步骤中取放;

8. 用塑料或玻璃容器及纸巾自制湿盒, 在样本处理过程中使用湿盒保持样本环境的湿润, 一定避免样本干燥;

9. 固定样品, 需自备多聚甲醛;

10. 悬浮细胞可用以下方法固定或贴附在玻片上: 4℃缓慢离心(1000rpm) 5 分钟, 去除细胞培养上清, 并将细胞重新悬浮在4%的甲醛溶液(溶于1×PBsS溶液) 使其终密度为1×10⁶/ml, 室温孵育10分钟。按照上述方法离心收集细胞, 去除固定液并用80%乙醇溶液以相同细胞密度重悬。固定后的细 胞可以保存在4℃。固定后的细胞(100-300ul) 可直接固定在玻片上, 使用聚L-赖氨酸包被的玻片可以提高细胞的黏附性。

RC0171-TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（FITC）.pdf